本技术公开了基于tyrb基因高效编辑创制无黑斑金黄色草鱼的方法及应用,包括靶基因选择和靶点设计:选择草鱼tyrb基因作为靶基因,采用CRISPR/Cas9编辑技术并设计CRISPR/Cas9系统所需的sgRNA,靶点设置三个、gRNA合成、将Cas9蛋白、三个gRNA进行组合配制后注射到草鱼受精卵中以及将受精卵置于水中流动孵化等步骤,及该方法在创制无黑斑金黄色草鱼品种的应用。本发明解决了目前金草育种的品种色彩不纯,存在黑斑及黑眼的问题,采用CRISPR/Cas9多靶点编辑技术针对tyrb基因进行高效基因突变,能够快捷、高效地获得无黑斑残留、纯金色且红色眼睛的草鱼种质,另外获得的金色草鱼新品种可育且生长性能良好,显著提高商品鱼经济价值;能够在养殖场广泛推广应用。
背景技术
草鱼(Ctenopharyngodon idella)作为我国四大家鱼之一,具有广泛的经济价值和市场需求。随着人民生活水平的不断提高,人们对鱼类的观赏性要求也日益增强,尤其是对色彩鲜艳、外观美观的草鱼品种需求增长显著。其中,金黄色草鱼(以下简称“金草”)因其华丽的色彩备受欢迎。然而,现有市面上的金草,如俄罗斯金草,仍存在身体黑斑以及为黑色眼睛等不足之处,具体外形如图1所示。另外市面上售卖的金色草鱼或赤目金丝鲩主要通过选择性育种和杂交育种等传统方法产生。这些方法在一定程度上能够实现目标性状,但仍存在稳定性不足、体色不纯等问题。
现有的金草在体型和色彩上虽具备一定的观赏价值,但其身体尤其是头部仍会残留黑斑,且眼睛呈黑色,整体色泽不够鲜艳。这些缺点不仅影响了金草的观赏效果,还限制了其在高端市场中的应用和推广。因此,亟需一种能够解决现有金草色彩不纯、存在黑斑及黑眼等缺点的新型金黄色草鱼品种的创制方法。
实现思路