本创新设计介绍了一种新型双表达蛋白载体,该载体包含TNFSF14和/或anti-CD3 svFc的目的片段。载体中TNFSF14的核苷酸序列参照SEQ ID
背景技术
肿瘤免疫治疗是继手术、放疗、化疗等传统治疗方法后快速发展的新一代肿瘤治疗方法,具有巨大的临床应用前景。基因治疗作为肿瘤免疫治疗研究中的一项重要突破,通过效应蛋白的定点表达,实现肿瘤的高靶向治疗。基于内源和过继性的T细胞疗法作为肿瘤免疫疗法的重中之重,在血液瘤治疗中已取得显著进展,但是在实体瘤的治疗中仍困难重重,如T细胞浸润能力差、穿透能力低、以及T细胞与肿瘤细胞结合能力弱等。针对上述挑战,肿瘤基因疗法或可成为有效的治疗策略之一。
目前,质粒载体在生物学通常用于基因的克隆和表达,也可以作为转基因工具将特定的基因导入到宿主细胞中。在人体内,质粒载体介导的基因操作通常用于研究基因功能、蛋白质表达、基因治疗等。一些采用肿瘤特异性启动子的质粒已被设计用于增加T细胞的浸润或活性,但多依赖于表达单一的趋化因子或免疫检查点抑制蛋白。比如目前,注射趋化因子(CCL-5、CXCL-9)和单克隆抗体(aPD-L1、aCTLA.4)等方法被广泛应用于增强T细胞的浸润能力和治疗效果。但单一的趋化因子对于T细胞的募集效果差强人意,而单克隆抗体对于T细胞的活性维持也难以持久。同时,还存在严重的脱靶问题,在一定程度上限制了其广泛应用。
通常,质粒中的目的片段可以是编码特定蛋白的,也可以是调控基因表达的元件,如启动子、增强子等。目的片段是否能在人体内实现其作用,存在多个因素的协同作用,包括:1)基因的功能:目的片段是否编码功能性的蛋白质或执行其它重要的生物学功能;2)表达水平:基因是否能够在宿主细胞中高效地表达出对应的蛋白质;3)表达的稳定性:表达的蛋白质是否稳定,以及在细胞内的定位等;4)转导效率:质粒载体的转导效率,即目的片段是否能够有效地整合到宿主细胞的基因组中,或者表达出的蛋白质是否能够进入到细胞的其它部分;5)免疫原性:表达的蛋白质是否会被宿主的免疫系统识别为外来蛋白,从而激发免疫反应,等。由此目的片段能否在人体内实现其作用,需要经过科学设计和测试,适当的目的片段的选择是重中之重。而针对多个目的片段,更需要通过严格的筛选和测试来确认不同的目的片段是否都能成功地在人体内实现其作用,以确保研究的安全性和有效性。
当前不仅尚未克服T细胞疗法在实体瘤治疗中存在的缺陷,也未成功克服质粒载体相关应用的困难,难以从根本上改善T细胞的募集和浸润问题,也难以长久维持T细胞活性。
实现思路