本技术通过优化筛选参数,成功开发出一种与凝血酶蛋白具有高亲和力的RNA适配体。该适配体具有分子量小、化学性质稳定、便于保存和标记的特点,能够通过空间构象匹配和碱基堆积作用与凝血酶蛋白紧密结合。
背景技术
凝血酶是由凝血酶原(凝血因子II)通过蛋白水解生成的一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶,它会将可溶性的纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白,从而形成血凝块,因此凝血酶的促凝作用在冠心病和其他血栓性疾病中发挥关键作用。及时检测以及靶向调控血栓性疾病患者体内的凝血酶含量对其病情的控制具有重要意义。
通过SELEX技术筛选出来的适配体与不同大小的靶标分子结合的基本原理相似,都是由于单链寡核苷酸碱基之间的相互作用,往往会形成许多空间构象,如发夹、假结、G-四聚体等,通过空间构象匹配、序列中碱基的堆积作用、带电基团之间的静电作用或氢键作用等,从而实现适配体与靶分子之间的特异性结合。
现有的检测或调控凝血酶的药物存在合成复杂、不容易修饰、亲和力低或特异性差等问题。现有凝血酶的适配体序列多为富G序列,容易受体内各种生命活动的干扰,亲和力和特异性不理想。
因此,对于凝血酶的检测和调控,迫切需要研发出安全高效、亲和力高、特异性好且成本低的物质。
实现思路