本技术介绍了一种核酸修饰生物细胞及其在这些细胞中调节特定核苷酸序列编码靶标基因表达的方法。
背景技术
细胞治疗使用被注射、移植或植入患者体内的活细胞以实现药物效果。例如,在免疫治疗过程中,移植能够通过细胞介导的免疫对抗癌细胞的T细胞,或者移植干细胞以再生病变组织。
携带嵌合抗原受体(CAR)的细胞是细胞治疗方法的核心工具。CAR使改造的T细胞能够清除展示通过CAR靶向的抗原的细胞。自体CAR T细胞已成功用于治疗B细胞恶性肿瘤,其中四种获批产品靶向CD19,一种靶向B细胞成熟抗原。其他几种CAR T细胞产品正在开发中,目前正在进行100多项针对血液系统恶性肿瘤和实体瘤的临床试验。CAR T细胞也可用于对抗自身免疫性疾病和病毒感染。
尽管CAR T细胞最初取得了成功,但一些挑战继续阻碍着它们的广泛临床应用。原发性耐药性发生率在10%-20%,复发也很常见,发病率为30%-50%。输注的T细胞内的耐药性机制包括体内扩增失败、早期耗竭、持久性差、适应性不足等。肿瘤本身也可能导致靶抗原丢失、下调或突变形式的耐药性。细胞因子释放综合征(CRS)或免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)形式的CAR T细胞介导的毒性从轻度到重度不等,导致1.5%的致死率。长期和/或严重的嗜中性白细胞减少症以及B细胞发育不全可能导致致命的感染。
目前批准的CAR T细胞代表了具有不同功效的异质克隆群体。这种异质性归因于(1)基于慢病毒载体的制备导致偶然的基因组整合,以及(2)单采血液成分术(apheresis)产品的表型异质性。
有效的CAR T细胞克隆能够增殖,清除靶向的细胞,不会耗竭,并在体内持续数月至一年。然而,高活性(hyperactive)的CAR T细胞克隆——增殖过多且没有耗竭会引起毒性。
正在测试几种T细胞调节策略,以降低T细胞介导的耐药性和毒性,并扩大可靶向疾病的范围。这些调节策略是基于目前对为什么某些CAR T细胞克隆比其他克隆更有效的理解。
这些调节策略中的一种涉及所谓的小干扰RNA(siRNA)的使用。例如,在WO2015/084897中公开了在细胞治疗中使用siRNA来调节细胞的活性。或者,为此目的,在细胞治疗中使用所谓的小发夹RNA(shRNA),例如在WO2020/206248、WO2019/138354、WO2015/136001或WO2011/059836中公开的。
然而,在目前的技术中,细胞治疗的有效性不足,特别是毒性的问题尚未得到令人满意的解决。
在这种背景下,本发明的目的是提供一种生物细胞,其可以在细胞治疗的背景下使用,而不会引起所描述的当前细胞治疗的问题,特别是毒性。特别地,本发明旨在提供这样一种生物细胞,其允许对靶基因或蛋白质的表达进行时序控制,使得表达发生在扩增阶段的开始或扩增阶段的晚期。
实现思路