本技术涉及植物组织培养,介绍了一种葡萄幼苗下胚轴体细胞胚再生体系的构建方法。该方法通过无核葡萄胚畸形幼苗下胚轴作为外植体,在KBN培养基中诱导形成胚性愈伤组织、非胚性愈伤组织和次生原胚团。次生原胚团在X6培养基中扩繁,获得质量增加的次生原胚团和体细胞胚。子叶期前的体细胞胚进行二次诱导,建立体细胞胚保持与扩繁循环系统。体细胞胚接种至X3培养基中分化胚轴和胚根,最终在WPM培养基中培养成苗。该技术成功诱导无核葡萄胚畸形幼苗下胚轴获得再生体系,并建立次生原胚团保持与扩繁循环系统,为葡萄遗传转化提供新的受体材料。
背景技术
葡萄作为全球重要的果树之一,对经济、社会和生态均具有显著的益处。葡萄属植物属于木质藤本植物,由于其生长周期较长以及基因组的高度杂合性,传统育种方法耗时较长。葡萄遗传转化技术的应用,使得对葡萄性状进行定向改良、缩短育种周期以及解析和验证基因功能成为可能,同时促进了基因在不同物种间的转移。这一技术已成为葡萄生物技术研究与应用的核心领域,也是葡萄品种性状改良的关键手段。
随着植物细胞工程技术在葡萄领域的应用,研究者通过体细胞胚发生和器官发生技术建立了再生体系。然而,关于器官发生途径成功的案例相对较少,且再生效率普遍不高。相比之下,葡萄体细胞胚再生体系以其遗传物质的稳定性、快速高效的繁殖能力、单细胞再生植株的性状稳定性以及转基因植株嵌合体较少等优势,成为了一个稳定高效的再生途径,被认为是遗传转化体系中最适宜的受体。然而,葡萄体细胞胚再生体系受到基因型、外植体、培养基成分等多种因素的影响,导致该途径普遍面临诱导效率低、体细胞胚萌发成苗困难以及畸形胚发生率高等问题。因此,亟需提供一种稳定的葡萄体细胞胚再生体系的建立方法。
实现思路