本技术涉及生物技术领域,特别是一种用于维持凋亡小体活性的储存液及其制备和保存方法。该储存液由人血清白蛋白、海藻糖、甘油、二甲基亚砜、四氢嘧啶、维生素C、组氨酸、葡萄糖、盐酸精氨酸、脯氨酸和氯化钠组成。使用此储存液,凋亡小体的活性可延长至七天或更久。该储存液适用于广泛的温度范围(-80℃至4℃),既可以作为冻存液,也可以作为冻干保护剂,有效降低凋亡小体的储存和运输成本,扩大其应用范围。此外,该储存液提高了凋亡小体在储存过程中的稳定性和完整性,为凋亡小体的产业化应用提供了便利。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)因其能够分化为不同的细胞类型,在调节免疫反应,减轻炎症等方面具有巨大的治疗潜力。然而,直接使用MSCs会存在损伤部位增殖难度大、具有免疫排斥反应以及潜在的致瘤性等风险,限制了其临床转化应用。应运而生的基于干细胞技术的无细胞疗法在再生医学领域提供了新的治疗策略。其中,细胞凋亡是程序性细胞死亡的一种形式,对于生长和组织稳态至关重要。凋亡小体(Apoptotic bodies, ABs)是死亡细胞在凋亡最后阶段释放的一种细胞外囊泡。凋亡小体的最新进展阐明了免疫调节、病毒清除、血管保护、组织再生、凋亡小体的疾病诊断潜力。此外,凋亡小体可用作药物载体,增强药物稳定性、细胞摄取和靶向治疗功效。凋亡小体在多种疾病的诊断、预后和治疗方面具有广阔的潜力,包括癌症、全身炎症性疾病、心血管疾病和组织再生。
间充质干细胞的凋亡小体提取过程复杂且不易于保存,常规使用、储存方式是将凋亡小体置于PBS磷酸盐缓冲液中于2~8℃使用,于-80℃冻存。虽然PBS磷酸盐缓冲液可为其提供人体体液类似的渗透压和pH值,但在维持凋亡小体稳定性方面仍具有一定局限性,凋亡小体活性仅可以维持三天甚至更短时间。首先,无论是冷藏、冻存还是冻干PBS均无法提供更多功效以防止凋亡小体聚集,生物特性、标志物改变和含量、活性的降低。使得凋亡小体保存时间短,存储运输成本高,应用范围窄。其次,目前凋亡小体进展主要处于早期研究阶段,即使为数不多产品已经进入早期临床,也主要用于疾病诊断、预后监测等方面。若能开发一种安全、有效、稳定、适用于凋亡小体的配方,既可适用于凋亡小体早期研发,又可形成制剂用于临床,因此,急需要一种可以延长凋亡小体活性的制剂。
实现思路