本技术涉及食品安全领域,介绍了一种唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的核酸适配体及其筛选技术。该适配体的DNA序列编号为SEQ ID No:1。筛选方法旨在提高食品安全检测的准确性和效率。
背景技术
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)是一种革兰氏阴性杆菌,主要作为植物病原菌存在,同时也能对人类造成条件性致病。该细菌在适宜的环境下会产生一种名为米酵菌酸的毒素,这种毒素具有极强的耐热性,煮沸或高压蒸煮都无法破坏其毒性,因此食物中一旦被污染后,食用后可能导致严重的食物中毒。
迄今为止,用于检测唐菖蒲伯克霍尔德氏菌最常用的方法是GB4789.29–2020,这个方法是通过常规微生物培养,需要至少一周才能检测出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌。此外,已经提出了许多技术用来鉴定唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,如聚合酶链反应(PCR),RPA-CRISPR/Cas12a测定,环介导的等温扩增(LAMP),与传统方法相比,这些方法显示出更多的优势,具有快速性、高灵敏度和特异性。然而,这些技术的应用受限于实验室环境中,涉及多对引物,且残留污染引起的假阳性结果有时可能会使人们感到困惑,结果可重复性差,使其不适合现场食品安全的监测。为了快速检测唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的污染,开发针对该细菌的特异性识别分子非常必要。核酸适配体是一种能够与特定目标物高亲和力和特异性结合的寡核苷酸片段,与传统的抗体相比,核酸适配体具有高亲和力和特异性、化学稳定性好、合成简便及易于修饰等特性。目前,还没有针对于该菌的特异性核酸适配体。常见的核酸适配体筛选方法主要有Cell-SELEX技术、电泳迁移法及体外进化技术,但这些方法通常需要大量的实验验证和优化。因此,开发一种简便、高效的适配体筛选方法对于快速检测唐菖蒲伯克霍尔德氏菌具有重要意义。
实现思路