本技术提供了一种用于肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法,属于生物检测技术领域。所述试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2,其特征在于:包括的成分及相应含量为:试剂R1:三羟甲基氨基甲烷缓冲液30‑60mmol/L;聚乙二醇6000 1‑3g/L;表面活性剂A15‑25g/L;叠氮钠0.05‑0.15g/L;试剂R2:三羟甲基氨基甲烷缓冲液30‑60mmol/L;包被有鼠抗人肝素结合蛋白抗体的胶乳颗粒1‑3g/L;表面活性剂B 15‑25g/L;稳定剂5‑10g/L;叠氮钠0.05‑0.15g/L;该试剂盒通过对试剂1和试剂2中表面活性剂和稳定剂的选择,使得到的试剂盒具有较高的精密度和稳定性,且抗干扰能力也明显提高。
背景技术
肝素结合蛋白(heparin-bindingprotein,HBP)也被称为azurocidin或者CAP37,是中性粒细胞来源的颗粒蛋白,HBP的趋化活性、杀菌能力以及肝素结合能力都与其自身带有较强的正电荷有关,HBP作为一种趋化物质,可以激活单核细胞和巨噬细胞,诱发血管渗漏和组织水肿,体外能诱导Ca2+依赖的细胞骨架重排以及单层内皮细胞间隙的形成。HBP能增加血管内皮细胞通透性是因为HBP带有较强的正电荷,与内皮细胞接触导致内皮细胞胞内Ca2+快速激活,形成肌动蛋白张力纤维,从而导致细胞旁通路渗漏。HBP的浓度过高会导致严重的血管渗漏,从而引起低血压甚至休克,除此之外,HBP还与软组织感染等多种感染有关,这表明HBP与严重的细菌感染有紧密的关系,极有可能成为临床诊断指标和药物治疗靶标。
目前临床上检测肝素结合蛋白含量的常用方法为酶联免疫法、免疫比浊法和免疫荧光法。酶联免疫法的检测灵敏度高,但存在操作过程繁琐,检验周期长,检测人工成本较高的缺陷;免疫比浊法检测敏感度低,线性范围窄,并且检测周期较长,因此无法有效地满足临床需求;因此目前更多的是采用荧光免疫法对肝素结合蛋白进行检测,但是该方法也存在抗体使用量大,试剂成本高,且大部分产品在低值区域的灵敏度不高,临床参考值附近重复性差的缺陷,导致较难准确定量检测肝素结合蛋白。
中国专利CN115980331A公开了一种检测肝素结合蛋白的试剂盒。其中含有样本处理剂和检测试剂盒;所述样本处理剂包括:质量浓度为0.01-0.5%的海藻酸钠、0.1-10g/L的聚氧乙烯月桂醚、以及30-100mmol/L的Tris缓冲液;所述样本处理剂的pH为7.8-8.2。该发明的检测肝素结合蛋白的试剂盒,可同时检测血清、血浆和全血中的肝素结合蛋白,且无需对血液样本进行离心等处理方式,大大缩短了检测时间;而且能更高效的提取肝素结合蛋白且降低背景干扰,具有灵敏度高、重复性好、特异性好、线性范围宽、成本低廉等优点。
中国专利CN115656518A公开了一种检测人血浆和尿液中肝素结合蛋白的检测试剂盒,包括试剂R1、试剂R2和校准品,所述试剂R1包括抗人体血浆和尿液中同源蛋白干扰的阻断剂、盐类和防腐剂;所述试剂R2包括第一聚苯乙烯胶乳微球、第二聚苯乙烯胶乳微球、保护剂和防腐剂,该试剂盒可消除同源样本干扰,可用于尿液样本检测,具有检测速度快、线性范围好、稳定性好的特点。
但是现有的试剂盒精密度和稳定性以及抗干扰能力均不能更好的满足要求,因此需要开发一种精密度和稳定性均比较高,且线性关系好的基于胶乳免疫比浊法的用于肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法。
实现思路