用于诊断新冠病毒感染的质谱模型的构建方法
2025-02-25 19:26
No.1344027751405068288
技术概要
PDF全文
本技术提供一种检测新冠病毒感染的特征多肽组合物,包括29种具有特定质荷比的特征多肽,通过分析所述特征多肽的表达情况,可判断该样本是否为新冠病毒感染患者。本发明还提供根据该特征多肽组合物所制备的质谱模型、诊断新冠病毒感染的产品等用途。本发明首次提出根据新冠病毒感染患者/正常人、肺结核患者、具有新冠病毒感染类型症状对照中寻找具有差异的多个特征蛋白组合,突破了传统的仅限于正常人和新冠病毒感染患者中寻找特征多肽的研究思路,有效地避免与新冠病毒感染症状相似的假阳性结果的感染,并具有操作简单,检测成本低,准确率高,有望用于新冠病毒感染的大规模筛查。
背景技术
冠状病毒是一类主要引起呼吸道、肠道疾病的病原体。这类病毒颗粒的表面有许多规则排列的突 起,整个病毒颗粒就像一顶帝王的皇冠,因此得名“冠状病毒”。冠状病毒除人类以外,还可感染猪、 牛、猫、犬、貂、骆驼、蝙蝠、老鼠、刺猬等多种哺乳动物以及多种鸟类。新型冠状病毒COVID-19 是以前从未在人体中发现的新型冠状病毒新毒株,其传播规律、感染机制、以及进化和变异规律仍然 不清晰,为防治带来了困难。 为了预防新型冠状病毒(COVID-19)感染的发生和流行,迅速采取措施,有效控制疫情的发展蔓延, 新型冠状病毒感染的快速检测尤为重要。长期以来,对冠状病毒的鉴定都采用传统的微生物学检测方 法,即形态学、生理生化特征及血清学鉴定。此方法虽然准确度高,但所需时间太长,最快也要十几个小时才能完成,难以适应快速检测的要求。以多重PCR为基础的核酸检测方法,对冠状病毒的早期 诊断和传染源的发现具有重要意义。并且多重PCR检测针对多个基因,假阴性率比单重PCR降低, 然而,PCR检测方法也存在检测过程繁琐、成本较高、检测高通量有限。 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,简称MALDI-TOF MS)技术,是20世纪80年代末问世并迅速发展起来的一种质 谱分析技术。其质量分析器是一个离子漂移管(iondirft tube),由离子源产生的离子首先被收集,在 收集器中所有离子速度变为0,使用一个脉冲电场加速后进入无场漂移管,并以恒定速度飞向离子接 收器,离子质量越大,到达接收器所用时间越长;离子质量越小,到达接收器所用时间越短。根据这一原理,可以把不同质量的离子按质荷比大小进行分离,准确检测多肽、蛋白质、核酸、多糖等生物 大分子的分子质量和纯度,具有准确性高、灵活性强、通量大、检测周期短、性价比高的优点。 近年来,已经出现质谱技术来检测致病微生物或病毒的特征多肽或多肽的质谱技术。例如,中国 专利申请CN102337223A,“产黄青霉抗真菌蛋白Pc-Arctin及其制备方法”,公开了一种检测产黄青霉抗真菌蛋白Pc-Arctin的MALDI-TOF鉴定方法,其中从平板上挑取产黄青霉A096孢子接种于SGY液体 培养基培养,预处理得到粗蛋白溶液在色谱柱上分离纯化,并在羧甲基阳离子交换色谱柱上分离纯化, 收集各洗脱组分,各组分离心超滤浓缩至所需体积,以宛氏拟青霉为敏感受试指示菌,追踪抗真菌活 性组分,确定的活性成分判断获得蛋白的纯度;割取SDS-PAGE电泳图上的单一条带,进行MALDI-TOF 鉴定。该方法仅适用于特定微生物,且需要多重蛋白纯化过程,最终用MALDI-TOF鉴定特征多肽 Pc-Arctin,其过程繁琐,适用面窄,不能实现质谱检测病毒的目的。 中国专利申请201110154723、“MALDI TOF MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方法”和201110154469、 “MALDI TOF MS辅助鉴定霍乱弧菌的方法”公开了一种利用MALDI TOF MS技术辅助鉴定细菌的方法, 包括:预处理细菌培养物,采集所有菌株样品的MALDI TOF MS图谱,根据软件制备细菌标准图谱, 使用相同的方法检测并采集待测细菌的图谱,以及比较二者图谱,根据匹配分数进行判定。由于该方法使用常规的处理(通过无水乙醇、甲酸和乙腈处理,并辅以离心,最后吸取上清液进行检测),尽 管其在一定程度上能表征该细菌的特征图谱,但由于其待测物中含有蛋白质、脂类、脂多糖和脂寡糖、 DNA、多肽及其它能被离子化的分子,其得到的图谱实质上是上述各种分子的图谱集合,因此既需要 处理和比对的图谱信息量过大,并且因待检分子过于庞大而导致其图谱特征性偏低,只适用于某具体 细菌而无法推广到其他大量的病毒检测中。 中国专利申请200880121570、发明名称“用于诊断和监测精神疾病的方法和生物标志物”报道了 可以通过MALDI-TOF质谱技术,检测包括流感病毒在内的近百种与精神疾病相关的生物肽。然而,该 方法仅仅简单概括了各种可能的技术,其既没有报道具体方案,也没有报道冠状病毒的特定靶点,因此难以教导研究者通过MALDI-TOF质谱技术来检测流感病毒。 因此,目前需要一种通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)来检测新型冠状病 毒感染的特征多肽质谱模型以及用途。
实现思路
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该技术已申请专利,如用于商业用途,请联系技术所有人!
技术研发人员:
廖璞孙巍乔亮吕倩马庆伟
技术所属: 北京毅新博创生物科技有限公司.
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