iPSC衍生的iNK细胞中杂质细胞的检测方法
2025-02-24 17:41
No.1343638932684021760
技术概要
PDF全文
本技术涉及iPSC衍生的iNK细胞中杂质细胞的检测方法。具体地,本发明提供了一种定量分析iPSC衍生的NK产品中杂质细胞的方法,根据单细胞测序法获得的iNK细胞分化过程中的杂质细胞种类,通过特定的荧光抗体组合建立多色流式分析方法,在一次检测中同时鉴定所有的杂质细胞类型,并能定量分析其占比。本发明的流式分析法能一次性检测出iNK细胞中的所有杂质细胞,包括肥大细胞、NKT细胞、T细胞、单核细胞和巨噬细胞,检验方法简单、成本低,检验灵敏度高,在iNK细胞的质量检测领域有应用前景。
背景技术
iPSC是一种理论上具有分化为人体任何类型细胞的干细胞,iPSC衍生iNK细胞,具备成为通用型量产化,可治疗实体瘤和自身免疫病潜力的细胞产品。但在iPSC分化为iNK细胞的过程中,可能会产生非NK的杂质细胞。分化出杂质细胞会不仅会影响细胞纯度,还可能产生安全性风险,例如CD3阳性细胞可能引起的GvHD反应。有研究报道,当输入人体的TCRαβ+T(CD3阳性细胞的某种亚型)细胞控制在5×104/kg时,可限制产生GvHD的风险。因此,iPSC衍生的iNK细胞中杂质细胞的检测方法是及其重要的安全性质控手段。 目前对于iPSC衍生的NK产品中杂质细胞的检测方法主要包括单细胞测序、数字PCR(ddPCR)法。单细胞测序法可以在未知杂质细胞类型时,对产品中的杂质细胞类型进行鉴定,但其检测流程耗费长、费用高,且灵敏度低。ddPCR法需要在明确杂质细胞类型后才能针对行的设计引物或选择抗体组合检测杂质细胞,且ddPCR法受限于引物组合数量,无法在一次检测中鉴定多种杂质细胞。 因此,本领域迫切需要开发一种高灵敏度、流程简单且成本低的NK产品杂质细胞检测方法。
实现思路
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该技术已申请专利,如用于商业用途,请联系技术所有人!
技术研发人员:
李成宇宗鸿亮杨勇王立群
技术所属: 星奕昂(上海)生物科技有限公司.
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