本技术提供了明场多色免疫组化染色方法,其在明场显色条件下,能够在一张组织切片上同时检出多种抗原,先以第1个第一抗体和辣根过氧化物酶标记的第二抗体标记第1种抗原,然后采用显色剂进行显色,记录显色后的组织图像,再采用脱色剂进行脱色,重复上述步骤,依次完成多种抗原的检出,以及,明场多色免疫组化染色试剂盒。本发明能够为肿瘤及其免疫微环境、组织损伤和愈合等研究领域,提供一种设备要求更为简单且检测成本更为低廉的多通道可视化分子病理检测方法。
背景技术
免疫组化技术,是基于抗原抗体特异结合的原理,以酶或荧光素连接的抗体,在组织原位对靶抗原进行标记,然后通过检测酶-底物反应生成的有色产物,或者通过检测荧光素的荧光信号,从而实现对靶标抗原定位和定量检出的技术。
多色免疫组化技术,是在一张组织切片上同时标记多种抗原的技术。该技术可直观地显示多种抗原在组织细胞中的共定位和共表达情况,在肿瘤及其免疫微环境、组织损伤和愈合等研究领域,具有不可替代的重要作用。现有的多色免疫组化技术,均基于荧光成像。通常采用不同的荧光素连接的多种抗体,对组织中的多种抗原同时或依次标记,从而在一张组织切片上同时检出3至5种抗原。也有技术先标记并记录第1种抗体的荧光信号,然后对其信号进行萃灭,再标记第2种抗体,以此循环往复,并采用图像处理软件对每种抗原的图像进行叠加,从而在一张组织切片同时检出3至8种抗原。此类技术须使用荧光显微成像设备以及荧光素连接的抗体,仪器设备要求高,试剂市场价格高昂。
明场免疫组化技术,是以酶连接的抗体标记靶抗原,再加入底物与酶反应产生有色产物,然后在明场下对有色产物进行观察和分析,从而实现靶抗原的检出。该技术仅需明场显微成像设备即可观察结果,且酶连接抗体在临床和科研领域应用广泛,市场价格低廉。但是酶-底物显色体系的产物分子量较大,会遮盖相邻抗原,现有的明场免疫组化技术仅可同时检出1~3种抗原,无法实现在一张组织切片上更多种抗原的同时检出。
实现思路