本技术涉及一种用于mRNA疫苗制备的T7 RNA聚合酶突变体,该突变体具有提高的热稳定性和转录效率。该技术属于生物技术领域,详细描述了与野生型T7 RNA聚合酶相比,突变体的制备过程及其性能提升。
背景技术
mRNA疫苗作为一种新型疫苗平台,因其设计快速、生产灵活以及免疫反应显著的特点,已在新冠疫苗等领域得到应用。然而,mRNA的工业化生产仍面临许多挑战,特别是在转录效率、热稳定性以及转录副产物的控制方面,直接影响mRNA的产量、质量和生产成本。
T7 RNA聚合酶是体外转录mRNA的核心酶,然而传统T7RNA聚合酶在高温下的酶活性较低,导致转录效率下降。此外,T7RNA的体外转录反应中常伴随副产物的生成,影响mRNA的纯度和产量。为了克服这些问题,许多研究者通过突变改造T7 RNA聚合酶,旨在提升其热稳定性和酶活力,并减少副产物的生成。
如CN202210456084.4中公开了具有高转录活性的T7 RNA聚合酶突变体及其应用,质谱鉴定野生型T7 RNA聚合酶、突变体T7 RNA聚合酶的siRNA产量、纯度发现,突变体T7RNA聚合酶的产物无其他杂质,纯度较高,浓度可达6.2e4。但其中未公开突变体的酶活力、比酶活力。
又如CN202211498759.8中公开的具有增强的热稳定性的T7-RNA聚合酶突变体,在45℃条件下仍保留较强的转录活性,可以适用于较高温度条件下RNA的生产。但其中未公开突变体的酶活力、比酶活力。
公开于背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域普通技术人员所公知的现有技术。
实现思路