本技术涉及一种DNA水凝胶搭载淀粉酶的制备方法及其应用领域。该技术利用滚环扩增法生成DNA单链,构建水凝胶结构,并通过DNA甲基转移酶处理,实现与特定分子的有效结合。
背景技术
DNA水凝胶的设计和制备是近几年生物医学领域中关注的焦点之一,它是由DNA分子自组装形成的一种介于固体和流体间的亲水材料,具有较高生物相容性和多种可设计的刺激响应能力,现已广泛应用于药物递送和人工组织等智能诊疗领域中。
成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced ShortPalindromic Repeats,CRISPR)技术,简称CRISPR技术,其中一些新的发现给核酸检测模式带来了新的契机,CRISPR-Dx(CRISPR-based diagnostic)技术与SHERLOCK(SpecificHigh-Sensitivity Enzymatic Reporter UnLOCKing)技术依靠Cas12a、Cas13a蛋白,在预扩增后,激发Cas蛋白的反式切割活性,在常温条件下就能够切割分子信标,实现信号放大并且具有高灵敏度和特异性。目前针对CRISPR技术进行核酸检测,最终的信号收集模式还是依靠酶标仪以及荧光定量PCR仪器进行荧光信号的实时采集,这一类信号收集方式极大限制了核酸检测的便携性。但是CRISPR-Dx这一新型技术给便携式核酸检测提供了新思路,使其在病原体核酸检测尤其是POCT(point-of-care testing)检测中具有很大的应用前景。
目前有多种基于CRISPR的POCT检测方法,这些方法利用各种信号传感技术,如电化学信号、荧光传感等来实现检测。其中血糖仪作为一种便携、易操作、低成本的POCT平台,可以很好地与CRISPR/Cas系统结合进行生物分析。但是大多数CRISPR技术和血糖仪结合的核酸检测方法都需要合成核酸蛋白偶联物并进行复杂的操作才能实现靶标的特异性信号输出。
实现思路