本技术涉及免疫学领域,详细描述了一种制备和应用能够识别SOX7蛋白K159位点三甲基化修饰的单克隆抗体的技术。该单克隆抗体能够特异性识别SOX7蛋白K159位点的三甲基化状态,为相关研究和临床应用提供了新的工具。
背景技术
性别决定区Y框蛋白7(SRY-related HMG-box gene 7,SOX7)是一个含有高迁移率族盒(high mobility group-box,HMG-box)的转录因子,其蛋白含有保守的DNA结合结构域(含有HMG盒)和转录激活结构域,发挥相应的生物学功能。有文献报告,SOX7可通过其DNA结合结构域与靶基因的启动子结合,并经其转录激活结构域增强靶基因的转录。SOX7作为抑癌基因可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖。阿司匹林通过p38-MAPK通路诱导SOX7过表达,介导人结直肠癌细胞的生长。此外,SOX7还可通过Notch信号通路促进血管生成。
大鼠Thy-1肾炎(Thy-1nephritis,Thy-1N)是一种公认的研究人类系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN)的动物模型,给大鼠注射抗Thy-1抗原的抗体后,该抗体能与大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangialcells,GMC)表面的Thy-1抗原结合,继而激活补体,引起炎症反应和GMC增生病变。已知补体作用靶细胞可分为全溶解型(lytic)和亚溶解型(sublytic),sublytic C5b-9虽不能导致细胞溶破,但能促发多种生物学反应。本课题组以往研究证实,Thy-1N病变具有补体C5b-9依赖性,尤其是sublytic C5b-9依赖性。
我们前期的实验显示,在Thy-1N大鼠肾组织内和体外受sublytic C5b-9刺激的大鼠GMC中SOX7的表达显著上升,于3h达到峰值。此外,Thy-1N大鼠和MsPGN患者肾切片中SOX7也是高表达的。在深入探讨SOX7的PTM发现,肾内SOX7蛋白的过度甲基化发生在Thy-1N大鼠和MsPGN患者的最早期。其中,SOX7蛋白的159位赖氨酸(K159)三甲基化的水平显著升高,也是MsPGN所特有的三甲基化位点。因此,如果能快速检测出发生了K159三甲基化的SOX7蛋白,就能在早期诊断出MsPGN,这对于预防和治疗MsPGN具有重要的意义。
目前,尚无检测SOX7蛋白K159三甲基化的试剂盒,急需一种能够特异性识SOX7蛋白的K159三甲基化的单克隆抗体配合,研发出灵敏度高、特异性高的免疫组化试剂盒,用于MsPGN疾病的诊断。
实现思路