本技术涉及一种具有嗜中性及热稳定性的α-半乳糖苷酶变体SLHY,其氨基酸序列详细展示于SEQ ID NO.2。该变体在保持活性的同时,相较于原始酶具有更高的耐热性,提升了工业应用潜力。
背景技术
α-半乳糖苷酶催化α-半乳糖苷键的水解,可摧毁细胞壁结构,促进细胞内营养物质释放,提高利用效率;并将食品中的α-半乳糖苷、棉籽糖、水苏糖等抗营养因子转化分解,降低食糜黏度,改善其营养成分,减少腹泻发病率,减轻或避免消化器官代偿性增生和肥大。此外,该酶在制药、增稠剂处理和造纸工业也有应用。
α-半乳糖苷酶在植物、细菌、真菌等生物中存在。但是,在酿酒酵母、乳酸菌等常用的食品安全级的微生物中,酶表达水平或酶活很低。此外,常见的α-半乳糖苷酶的最适pH偏酸或偏碱,且热稳定性差,不便于食品加工。因此,开发嗜中性或具pH 稳定性的α-半乳糖苷酶,寻找高产酶量的微生物或植物,成为近几年的研究热点。通过基因工程菌构建来解决上述问题,引起了科学家们的广泛兴趣,期望改变其工艺适用性在工业方面发挥更大的利用价值,以及在科技工艺和医药领域显示出更广阔的应用前景。
当前针对α-半乳糖苷酶的工程化改造主要是基因工程菌的构建和发酵工艺研究。如《一种α半乳糖苷酶及其制备方法和应用》(CN 112048495 A)公开了从脑膜炎败血伊丽莎白金菌(Elizabethkingia eningoseptica,FMS-007)中获得的α半乳糖苷酶多肽(Galase),编码α半乳糖甘酶多肽的多核苷酸,及其制备方法和应用;《一种高产扬奇青霉α-半乳糖苷酶的里氏木菌株的制备方法及其应用》(CN 105176849 B)公开了一株高产扬奇青霉α-半乳糖苷酶的里氏木霉菌株的制备方法及其应用,将扬奇青霉α-半乳糖苷酶的编码基因和筛选标记基因导入宿主里氏木霉菌Trichoderma reesei得到的菌;《一种重组α-半乳糖苷酶基因、载体、工程菌及其应用》(CN 107164398 B)本发明公开了一种重组α-半乳糖苷酶基因、载体、工程菌及其应用,构建的重组α-半乳糖苷酶基因酿酒酵母工程菌产α-半乳糖苷酶,可以进行豆类、糖蜜的发酵加工,可以去除发酵原料中的抗营养因子不良寡糖,提高食品、饲料的营养价值和消化吸收率,提高资源的利用率。但是通过突变改善α-半乳糖苷酶的嗜中性和热稳定性的研究与报道鲜见。
实现思路