本技术涉及一种利用树突状细胞外泌体制备肝癌疫苗的方法。该方法通过从成熟树突状细胞培养液中提取外泌体,开发出用于肝癌免疫治疗的疫苗。本技术中的树突状细胞外泌体具有免疫激活特性,为肝癌治疗提供新途径。
背景技术
肝恶性肿瘤仍然是一个全球性的健康威胁,2025年预计发病人数将超过一百万例。由于肝癌多重耐药机制、复杂的生理屏障和免疫微环境等导致肝癌的临床治疗效果很不理想。肝癌的发生、发展、转移和复发与机体的免疫系统有密切的关系。免疫治疗通过增强机体免疫功能可激活抗肿瘤免疫应答,从而抑制肿瘤进展、复发和转移,已成为肿瘤临床研究的热点。肝癌疫苗通过抗原可激活抗肿瘤免疫应答,有效地抑制肿瘤复发和转移,包括细胞疫苗、肽疫苗、树突状细胞疫苗(dendritic cells,DC)、DNA疫苗等,一般肝癌疫苗因肝细胞癌患者有长期慢性肝病背景,病人免疫功能处于抑制状态,不足以引起有效的免疫应答。树突状细胞由于其强大的抗原提呈作用,被用于负载肿瘤抗原,制备细胞性疫苗,被证实能有效地诱导抗原特异性免疫应答,如最早被批准上市的针对前列腺癌的DC疫苗。但是,体外培养增殖后的DC细胞回输后存在机体排异现象且操作繁琐,耗时昂贵,并且无法获得具有较强特异免疫原性的DC疫苗,严重限制DC临床疫苗的发展和应用。针对这一问题开发了外泌体疫苗,其可以一定程度上将佐剂和多表位抗原共传递到淋巴器官和抗原提呈细胞中,通过外泌体疫苗可以微调疫苗的细胞内释放和抗原的交叉表达。树突状细胞分泌的外泌体(DEX)被证明携带有绝大部分的DC细胞表面分子尤其是与免疫激活相关的组织相容性复合体(MHC-I和MHC-II)和协同刺激因子CD80、CD86、CD54等,由于具备这些特点,DEX被认为是一种可以用来代替树突状细胞而激活免疫反应的非细胞生物纳米疫苗。负载特异性抗原肽的DEX疫苗是新兴的免疫治疗策略之一。DEX疫苗作为非细胞疫苗,其组成明确,结构稳定,安全性高,可长期冷冻保存,可按照GMP批量生产,克服了DC细胞疫苗的诸多缺点,在肿瘤免疫治疗方面更有优越性。但其存在的副作用以及制备方法的复杂性,使其在制备和应用方面令人担忧。
近些年来,肝癌疫苗备受关注,已成为肝癌免疫治疗的研究热点之一。运用肝癌细胞、肝癌抗原、树突状细胞及核酸等为基础构建的肝癌疫苗,通过激发机体的免疫系统,诱导机体产生针对肝癌特异性抗原的免疫应答,达到杀灭表达肝癌抗原的肿瘤细胞而产生抗肿瘤效应的目的。通过临床试验发现,肝癌疫苗可减少肝癌的复发转移、改善患者生存质量以及延长存活时间,已成为肝癌综合治疗的重要部分。现对研究较多的几种肝癌疫苗的研究及最新研究成果进行概况:
肝癌疫苗主要涉及DC疫苗、基因修饰疫苗、高强度聚焦超声(high-intensityfo-cusedultra-sound,HIFU)固化疫苗、化学修饰肝癌细胞疫苗、人细胞融合肝癌疫苗和细胞因子-微粒肝癌疫苗等方面。有关DC疫苗和基因修饰疫苗的报道较多,但是,目前还没有一种制备简单且效果较好的肝癌特异性肿瘤疫苗。
本发明中的DC外泌体疫苗负载肝癌特异性多肽和免疫佐剂,是一种全新在非细胞性肿瘤疫苗,该DEX疫苗结合了DC疫苗和外泌体的双重优势,作为肝癌疫苗效果非常显著,可用于肝癌免疫治疗。
实现思路