本技术涉及一种针对猪流行性腹泻病毒的mRNA疫苗及其构建技术。该疫苗包含5'UTR、人源PLAT信号肽和猪流行性腹泻病毒S蛋白的截短体,旨在提高猪只对病毒的免疫保护。
背景技术
猪流行性腹泻病毒可以引起传染性肠道疾病猪流行性腹泻,造成肠细胞破坏和绒毛萎缩,导致水样腹泻和呕吐,新生仔猪感染后死亡率高达100%。2010年,我国规模化猪场猪群暴发严重腹泻疫情,经测序分析发现,病原为PEDV,且其S基因出现了插入、缺失或突变。这些变异导致病毒株的毒力增强,原有的疫苗无法提供足够的免疫保护。核酸疫苗设计简单,生产周期短,成本低且可以大量生产,可以进行基因治疗、肿瘤治疗、预防传染病等。
新冠疫情爆发推动了mRNA疫苗的快速发展,为应对全球性挑战,mRNA疫苗展现了其优势,2020年12月,美国FDA授权了2种mRNA疫苗mRNA-1273和BNT 162b2,它们在三期临床试验据表现出95%以上的有效率。PEDV变异毒株的突然出现,导致已有的传统疫苗的预防和疫病控制效果大大降低。灭活疫苗、弱毒疫苗等传统疫苗普遍存在研发周期长、防范毒株范围窄、免疫效果不稳定、免疫持续时间短等缺陷。本发明在分离临床流行毒株、掌握PEDV田间毒株的分子流行病学信息数据的基础上,着力研发一种安全性好、免疫原性强、具有广谱免疫保护效力的PEDV mRNA疫苗,为我国PEDV核酸疫苗的研发提供借鉴及必要的物质储备。
mRNA疫苗的模板设计的目的主要是提高蛋白表达效率,方法主要是优化5’UTR、3’UTR、添加Kozak序列、密码子优化、添加Cap-1、优化poly(A)、使用修饰核苷酸降低免疫原性等。目前UTR主要使用的是天然蛋白的UTR,如5’UTR主要来自珠蛋白、热休克蛋白70等基因,3’UTR主要来自血红蛋白α亚基或β亚基基因,但是针对猪源蛋白UTR的筛选未有报道。
实现思路