本技术涉及生物医药技术领域,介绍了一种创新的重组猪干扰素融合蛋白及其制备技术与应用。该融合蛋白由猪干扰素λ和蛋白C激活因子通过linker连接而成,具有可操作性。
背景技术
干扰素(Interferon,IFN)是一类动物机体产生的多功能分泌蛋白,涉及抗病毒、细胞生长调节和免疫激活等。干扰素具有增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞活力和抗病毒、抗肿瘤、免疫调节功能等多种生物活性,作为广谱抗病毒剂被广泛使用。干扰素在发挥作用的过程中不能直接杀伤或抑制病毒,而是通过与细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而达到抑制病毒复制的作用。
干扰素主要分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。其中III型干扰素主要包含1FN-λ1(IL-29),IFNλ-2(IL-28α)和IFN-λ3(IL-28β)三种,其功能性受体复合物是由IL-28Rα和IL-10Rβ(又称CRF2-4)组成的异二聚体,后又发现位于IFN-λ3上游的第四种III型干扰素IFN-λ4。猪的Ⅲ型干扰素(PoIFN-λ)主要由IFN-λl、IFN-λ3两种亚型构成。
养猪业中需要大量使用外源PoIFN-λ来提高猪的抗病毒能力。到目前为止,人们已经通过多种外源蛋白表达系统来提高PoIFN-λ的产量和活性,其中包括大肠杆菌、干酪乳杆菌毕赤酵母和哺乳动物细胞。利用毕赤酵母作为宿主细胞是一个很好的选择,因为它具有真核性质、高效的分泌能力和高细胞密度的培养能力。此外,在强调控的AOX1促进下,甲醇作为唯一的碳源和能源,可以进一步降低工业生产成本;其次,蛋白纯化过程简易,降低了生产成本。
目前,已经使用毕赤酵母对PoIFN-λ进行表达,但存在着该干扰素PoIFN-λ不能在毕赤酵母中富集等问题。
实现思路