本技术涉及生物技术领域,介绍了一种能够同时表达副猪嗜血杆菌外膜蛋白GAPDH和Omp26基因的猪霍乱减毒沙门氏菌重组菌株的构建方法。该方法通过将副猪嗜血杆菌相关基因与猪霍乱减毒沙门氏菌进行重组,旨在提高疫苗的免疫效果和安全性。
背景技术
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)临床上可引起多发性纤维素性浆膜炎、心包炎和关节炎为特征的副猪嗜血杆菌病,近年来该病的流行趋势不断上升,已成为养猪生产中重要的细菌性疾病之一。目前临床上灭活疫苗应用广泛,但因为存在不同的血清型菌株,无法提供完全的交叉免疫保护。亚单位疫苗的研发主要针对外膜蛋白、荚膜多糖、脂多糖等毒力因子进行研究。其中,GAPDH是副猪嗜血杆菌的一种膜蛋白,GAPDH是参与糖酵解途径的一种酶,参与副猪嗜血杆菌的毒力和致病力;而Omp26作为副猪嗜血杆菌外膜蛋白的一种,是副猪嗜血杆菌的主要毒力因子之一,具有良好的免疫原性。但是,常规的亚单位疫苗通常只表达一个蛋白,可能导致其免疫原性较低。此外,研究表明重组细菌载体疫苗可以类似于自然感染的方式将抗原蛋白递呈给宿主,诱导宿主产生免疫反应,相较于重组亚单位疫苗免疫效果更强。而且,重组细菌载体疫苗免疫动物后向宿主免疫系统递呈抗原蛋白的方式与自然感染相似,能够诱导宿主产生细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫反应。
沙门氏菌引发的猪传染性疾病在我国的养猪场中也流行广泛,对我国的养猪业和生产造成了一定的影响。在当前减抗替抗背景下,使用抗生素防治细菌性传染病变得困难。现在研究表明,将沙门氏菌改造并制备成弱毒疫苗活载体的研究思路已显示出广阔的应用前景。研究表明,革兰氏阴性菌细胞主要成分DAP合成途径中需要asd基因参与,asd基因的缺失会导致突变株在无外源DAP的条件下死亡,只有含有asd+质粒的细菌,才能在无外源DAP的宿主内存活。选用携带鼠伤寒沙门氏菌asd基因的pYA3493质粒用于外源基因表达,可与C500Δasd菌株平衡。
本申请人在先公开了CN109652414A构建一株表达副猪嗜血杆菌Omp26基因的猪霍乱减毒沙门菌重组菌株,通过构建猪霍乱沙门氏菌asd基因缺失株C500Δasd;然后将重组载体电转入所述猪霍乱沙门氏菌asd基因缺失株C500Δasd中,之后培养,得到所述副猪嗜血杆菌外膜蛋白基因Omp 26重组猪霍乱减毒沙门氏菌株C501Δasd pYA3493-Omp26。该菌株可表达Omp26基因。本申请人在先公开了CN109652413A构建一株表达副猪嗜血杆菌GAPDH基因的猪霍乱减毒沙门菌重组菌株,通过EcoRI和Hind III酶切位点构建pYA3493-GAPDH重组载体,然后将重组载体电转入所述猪霍乱沙门氏菌asd基因缺失株C500Δasd中,之后培养,得到所述副猪嗜血杆菌外膜蛋白基因GAPDH重组猪霍乱减毒沙门氏菌株C501ΔasdpYA3493-GAPDH。
但是以上所述菌株的免疫保护能力不强,需要对该菌株进一步改造,得到具有良好保护效果的菌株。
实现思路